上皮归还

肠外组织模型可用于测试以小肠上皮屏障损伤为特征的疾病的候选药物或生物制剂.

该模型

Epi肠是一种三维重建组织模型, 人细胞来源的小肠上皮细胞、内皮细胞和成纤维细胞. 高度分化的组织模型是在易于处理的组织培养插入物中在空气-液体界面(ALI)处产生的. 组织模型的结构分析显示柱状基底细胞和Kerckring褶皱. 超微结构的, 肠外展刷状边缘, 功能性紧密连接和黏液分泌颗粒, 与体内组织相似的.

超微结构分析: 体外Epi肠的透射电子显微图(TEM) (A) 和外植体组织 (B) 显示Brush边界(位于肠细胞管腔极)和紧密连接. Brush border – provides digestive 和 absorption surface; site for enzymes & 转运蛋白.

共焦显微图像显示: partial thickness (PT; epithelial cells only) 和 B) 全层(英国《凯发体育最新版》, 含成纤维细胞和内皮细胞(红色箭头)的小肠组织模型在微孔膜中培养, 在ALI条件下插入14天.

该方法

正常人原代小肠(SMI)上皮细胞, 成纤维细胞, 内皮细胞在单层培养中扩增，并接种到透明微孔膜插入物上重建三维SMI组织. 用1或2 mm活检穿孔器对3D组织进行损伤. 每天用相差显微镜分析损伤的组织以恢复上皮细胞, 迁移上皮细胞(细胞角蛋白19免疫染色)和成纤维细胞(波形蛋白免疫染色)的共聚焦成像, 通过测量跨上皮电阻(TEER)监测上皮屏障完整性的恢复, 和H&E染色检查创面闭合程度和再上皮化程度.

结果

损伤后，SMI组织TEER从160 Ω*cm2(基线)降至55 Ω*cm2. 受伤后第一天, 成纤维细胞在创面更加明显，肩部上皮细胞开始向创面迁移. 共焦和H&损伤组织的E成像显示成纤维细胞和上皮细胞在伤口愈合过程中的合作. 未被上皮细胞重新封闭的受伤区域最初被成纤维细胞覆盖. 总的来说，创面愈合在伤后4-6天内完成. 第4-6天:1)迁移上皮细胞重新封闭创面，迁移上皮细胞重新极化(共焦成像和H&E染色)和2)组织屏障恢复到损伤前的基线水平(TEER).

免疫组化显示器官型3D肠上皮(SMI-100-FT)组织在针尖(0.直径5毫米). 承载伤口的上皮细胞迁移以重新封闭受伤的组织. 迁移的上皮细胞表达细胞角蛋白19(红色, see arrow); nuclei are stained with DAPI (Blue). 注意:没有应用任何治疗来加强恢复过程.

伤口愈合进展: 免疫组化显示器官型3D肠上皮(SMI-100-FT)组织在针尖(0.直径5毫米). 承载伤口的上皮细胞迁移以重新封闭受伤的组织. 迁移的上皮细胞表达细胞角蛋白19(红色, see arrow); nuclei are stained with DAPI (Blue). 注意:没有应用任何治疗来加强恢复过程.

伤口愈合: 2 mm活检穿孔伤后3天SMI-100-FT组织模型的肠道恢复. 迁移上皮细胞被细胞角蛋白-19染色(红色), 波形蛋白成纤维细胞(绿色), 细胞核用DAPI染色(蓝色). 第三天，成纤维细胞处于伤口重新愈合的前沿.

障恢复: TEER测量显示损伤后上皮屏障完整性恢复.

伤口愈合进展: H&E染色显示肠外组织模型上皮恢复. 箭头指示沿伤口迁移的上皮细胞.

结论

新开发的SMI组织模型可用于检测以小肠上皮屏障损伤为特征的疾病的候选药物.

有关更多信息，请查看 Epi肠 和 参考文献.